Annexe 5. Estimation des protéines

5.1 Réaction de Pandy

La réaction de Pandy permet de mettre en évidence une augmentation des protéines dans le liquide céphalorachidien (LCR).
La concentration normale des protéines dans le LCR est de 0,20 à 0,45 g/litre.
Le test de Pandy est positif si la concentration de protéines est supérieure à 0,45 g/litre.

Matériel

– Gants
– Réactif de Pandy
– Pipettes Pasteur
– Tube à centrifuger conique en verre ou tube à essai
– Pipettes de 1 ml

Préparation de 500 ml de réactif de Pandy

Le réactif de Pandy est une solution saturée de phénol.
– Verser 30 g de phénol dans un flacon de 1000 ml.
– Ajouter 500 ml d’eau distillée et agiter énergiquement.
– Laisser reposer une journée.
– Vérifier qu’il reste bien du phénol non dissout :
• S’il en reste, filtrer : la solution est prête.
• Si le phénol est dissout en totalité, rajouter 10 g de phénol et attendre encore une journée avant de filtrer.

Le réactif de Pandy est hautement corrosif et toxique :
– Indiquer « corrosif » et « toxique » sur l’étiquette du flacon.
– Se laver les mains après préparation.

Technique

– Placer 1 ml de réactif de Pandy dans le tube à centrifuger.
– Ajouter une à une, 3 gouttes de LCR.
– Après chaque goutte, observer s’il se forme un précipité blanc dans le tube.
– Pour faciliter la lecture, placer une surface sombre derrière le tube.

Résultats

– Présence d’un précipité blanc : réaction de Pandy positive ;
– Absence de précipité blanc : réaction de Pandy négative.

5.2 Réaction de Rivalta

La réaction de Rivalta permet de mettre en évidence une augmentation des protéines dans les fluides corporels (liquide pleural, ascite).
La réaction est positive si la concentration de protéines est supérieure à 30 g/litre.

Matériel

– Gants
– Réactif de Rivalta
– Pipettes Pasteur
– Tube à centrifuger conique en verre ou tube à essai
– Pipette de 5 ml

Préparation de 100 ml de solution de Rivalta

– Verser 50 ml d’eau distillée dans une éprouvette de 100 ml graduée.
– A l’aide d’une pipette de 5 ml, ajouter 3 ml d’acide acétique glacial et remplir l’éprouvette avec les 50 ml d’eau distillée restants, jusqu’à la marque 100 ml.
– Verser la solution dans un flacon.

Technique

– Verser 2 ml de solution de Rivalta dans le tube à centrifuger.
– Ajouter une par une, 3 gouttes de liquide pleural/ascite.
– Après chaque goutte, observer s’il se forme un précipité blanc dans le tube.
– Pour faciliter la lecture, placer une surface sombre derrière le tube.

Résultats

– Présence d’un précipité blanc : réaction de Rivalta positive ;
– Absence de précipité blanc : réaction de Rivalta négative.